什么是细胞外囊泡？

细胞外囊泡 (EV) 是细胞分泌的小型膜结合颗粒，被认为充当细胞信使，将货物从一个细胞运送到另一个细胞。 EV 有多种亚型，其功能、货物和尺寸各不相同，直径范围约为 30-1000 nm。最小的 EV 类型是外泌体，其大小约为 30-150 nm。 EV 起源于称为多泡体 (MVB) 的细胞区室，其本身源自内体的内陷。当 MVB 与质膜融合并释放其货物时，囊泡就会被释放。

在生物医学研究中，电动汽车及其货物被用作癌症和其他疾病的诊断生物标志物。可以使用超速离心、PEG 沉淀和免疫捕获珠等技术从血液或其他生物液体中分离 EV。

EV 膜含有源自原始细胞质膜的跨膜蛋白，其中通常包括四跨膜蛋白家族的蛋白（例如 CD9、CD63 和 CD81）。 EV 内部含有蛋白质和 RNA 等细胞质成分。 EV 成分可以使用 RNAseq、蛋白质印迹和流式细胞术等方法进行分析。为了通过流式细胞术进行表征，研究人员可以使用对 EV 成分（如膜和核酸）进行染色的染料，以及与四跨膜蛋白或其他感兴趣的蛋白质结合的抗体。

EV分析：小目标，大挑战

电动汽车的小尺寸使得它们难以处理和分析。在流式细胞术中，EV 很难与细胞碎片和其他小颗粒区分开来，因为它们的大小等于或低于某些流式细胞仪的灵敏度极限。用某些染料或抗体染色可以帮助区分 EV 和其他颗粒。然而，重要的是使用不会形成聚集体的染色剂，因为这些小颗粒本身可能会与染色的 EV 混淆。这种聚集体一直让 EV 和外泌体研究人员感到沮丧。

在分析之前用于富集或纯化 EV 的方法也是一个重要因素。通过简单的 PEG 沉淀步骤富集的样品通常含有大量非 EV 脂质颗粒，这些颗粒也可能与膜染料结合。这些杂质可以通过使用其他 EV 纯化方法来减少，例如尺寸排阻色谱 (SEC) 或免疫沉淀。与抗四跨膜蛋白抗体结合的磁珠可以产生纯 EV 簇。然而，这些珠子可能与许多疏水性染料（例如膜染料）非特异性结合。

我们筛选了大量的抗体和染料，以寻找那些既能很好地对 EV 进行染色，又能显示出最小程度的聚集或没有聚集的抗体和染料（即在没有 EV 的情况下出现信号）。继续阅读下文，探索我们经过验证的 EV 抗体和染料。