酪胺信号放大 (TSA)，有时称为催化报告沉积 (CARD)，是一种高度灵敏的方法，可在荧光免疫细胞化学 (ICC)、免疫组织化学 (IHC) 和原位杂交 (FISH) 应用中检测低丰度靶标。

TSA 涉及辣根过氧化物酶 (HRP) 催化的酪胺在靶蛋白或核酸序列上和附近的原位沉积。在存在低浓度 H 2 O 2的情况下，HRP 能够将标记的酪胺底物转化为高反应性形式，该形式可以与 HRP 处或附近蛋白质上的酪氨酸残基共价结合。这会产生高密度酪胺标记，这也是该系统具有出色灵敏度的原因。酪胺可以用荧光团或半抗原（如生物素或 DNP）标记。

多轮酪胺信号放大可用于多色检测（参见图 2 和我们的技术提示：使用酪胺放大试剂盒进行多色荧光成像）。当 TSA 随后去除抗体用于多重荧光 IHC 时，TSA 不仅有助于检测低丰度目标，而且还简化了抗体组设计，因为可以使用选择的一抗，而不管宿主物种或同种型。

酪胺信号放大的优点：

• 检测低丰度目标

• 兼容 ICC、IHC 和 FISH

• 灵敏度高达传统方法的100倍

• 与传统 ICC、IHC 和 FISH 类似的工作流程

• 使用更少的一抗

• 用于多重 IHC 的简化一抗组合设计

酪胺信号放大试剂盒：

• 我们的试剂盒提供了酪胺标记的所有关键试剂

• 选择您的酪胺：生物素酪胺或六种 CF® 染料酪胺中的一种

• 选择您的 HRP 偶联物：山羊抗小鼠、山羊抗兔或链霉亲和素

• 试剂盒还包括扩增缓冲液和用于封闭的 BSA

酪胺扩增缓冲液：

• Tyramide Amplification Buffer Plus增强了酪胺信号放大的灵敏度。与我们下面的原始缓冲液相比，它提高了亮度、特异性和灵敏度。

• 即用型酪胺扩增缓冲液是我们最初的缓冲液配方，已被上述缓冲液取代。这种缓冲液的一个优点是无需添加过氧化氢。

图 1. 酪胺信号放大系统示意图。使用常规方法用一抗和二抗标记细胞或组织样本。与二抗偶联的辣根过氧化物酶催化标记的酪胺转化为反应性自由基。酪胺自由基然后与附近的酪氨酸残基共价结合，提供高密度标记。

图 2. 用于多重检测的连续酪胺信号放大工作流程示例。

图 3. FFPE 组织的多重酪胺标记。细胞角蛋白（盘）用 CF®488A-酪胺（绿色）标记；组蛋白 H1 用 Cy®3-酪胺（红色）标记；ZO1 用 CF®640R-tyramide（品红色）标记。一抗来自小鼠，二抗是 HRP 偶联的山羊抗小鼠。每个标记按顺序进行，在标记步骤之间通过微波处理去除抗体。

图 4. 使用两种酪胺扩增试剂盒对甲醛固定的 HeLa 细胞进行顺序标记。线粒体（绿色）用兔抗 COXIV 一抗和带有 HRP 山羊抗兔 IgG 和 CF®488A-酪胺的酪胺扩增试剂盒标记，然后进行过氧化物酶淬灭。核仁（品红色）用小鼠抗细胞周期蛋白 B1 一抗和含有 HRP 山羊抗小鼠 IgG 和 CF®568-酪胺的酪胺扩增试剂盒显现。肌动蛋白（红色）用 CF®640R-鬼笔环肽检测，细胞核（蓝色）用 DAPI 染色。

酪胺信号放大试剂盒

独立染料和半抗原标记的酪胺