CellBrite® Steady Membrane Staining Kits
- CellBrite® Steady 405
- CellBrite® Steady 488
- CellBrite® Steady 550
- CellBrite® Steady 650
- CellBrite® Steady 685
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CellBrite® Steady Membrane Staining Kits 可以在培养中对细胞表面进行长达数天的荧光成像。CellBrite® Steady Dyes 是独特的荧光膜探针，分布在细胞表面和细胞内隔室之间，因此细胞随着时间的推移保持细胞表面染色。使用 CellBrite® Steady Enhancer，可以减少或消除细胞内染色，以对细胞轮廓或边界进行成像。
保留在细胞表面，与其他快速内化的膜染料不同
对活细胞表面膜成像 24 小时或更长时间
可选的增强剂掩盖细胞内信号，用于细胞表面的选择性成像
在完全细胞培养基中快速、均匀地染色
染料颜色从蓝色到近红外，具有兼容 STORM 的选项
与标记后通过内吞作用迅速从细胞表面丢失的其他膜/细胞表面染料不同，CellBrite® Steady Dyes 在细胞内区室和质膜之间达到平衡。除了细胞内染色外，细胞在培养的数小时至数天的过程中仍保留表面染色。CellBrite® Steady Enhancer 是试剂盒中包含的可选试剂，可用于掩盖 CellBrite® Steady Dyes 的细胞内荧光，从而更有选择性地显示细胞边界。
套件组件
试剂盒尺寸基于 200 uL 标记体积，实际标记数量可能因培养室尺寸/染色体积而异。
试用装试剂盒（100 个标签）：
CellBrite® 稳定染料，1000X 溶于 DMSO，20 uL
CellBrite® 稳定增强剂，1000X 溶于 DMSO，20 uL
全尺寸套件（500 个标签）：
CellBrite® 稳定染料，1000X 溶于 DMSO，100 uL
CellBrite® 稳定增强剂，1000X 溶于 DMSO，100 uL
选择 CellBrite® 稳定染料
CellBrite® 稳定染料有从蓝色到近红外的颜色可供选择。CellBrite® Steady 550、650 和 685 荧光团与 STORM 的超分辨率成像兼容。CellBrite® Steady Enhancer 对细胞内荧光的掩蔽往往对远红 CellBrite® Steady 650 和 CellBrite® Steady 685 染料显示更完整的细胞内荧光掩蔽。
成功秘诀
染色后洗涤对于通过共聚焦显微镜成像是可选的，但对于通过落射荧光成像是必需的。对于荧光在可见范围内的染料（405、488 和 550），未经洗涤，通过显微镜目镜可能会或可能不会看到染色，因此您可能需要使用明场或其他标记物在最初无需洗涤的情况下聚焦细胞共焦成像。
CellBrite® 稳定染料毒性低，可在细胞培养基中连续孵育。增强剂可能对某些细胞类型有毒，尤其是在较高浓度时。增强剂可以与膜染料一起孵育或在染色后添加，以尽量减少增强剂对细胞的任何潜在影响。有关详细信息，请参阅产品协议。
为您的应用找到合适的染色剂
必须使用 CellBrite® Steady Dye 对活细胞进行染色。它们不能用于染色已经固定的细胞（染料主要标记固定细胞中的细胞内膜）。我们原创的CellBrite® 细胞质膜染料可用于固定后的细胞染色。要为您的应用找到合适的染色剂，请参阅我们的膜和细胞表面染色剂比较，或下载我们的膜和表面染色剂手册。
用 CellBrite® Steady Dyes 进行的膜染色在用甲醛固定后立即保留，但不能耐受甲醇或去污剂。如果细胞在甲醛固定后储存，随着时间的推移，染料会重新分布以染色细胞质结构。增强剂不耐受固定；如果 Enhancer 处理的细胞在染色后被固定，掩蔽将丢失，细胞内荧光将返回。对于允许免疫荧光染色透化的可固定细胞表面染色，我们推荐使用我们的CellBrite® Fix Membrane Stains或MemBrite® Fix Cell Surface Staining Kits。
CellBrite® Steady Dyes 易于在细胞之间转移，不推荐用于细胞追踪、共培养或移植研究。我们稳定、无毒的ViaFluor® SE 细胞增殖试剂盒可用于共价标记细胞，以便通过显微镜或流式细胞术进行长期追踪。请参阅我们的技术提示：使用 ViaFluor® SE 染料进行细胞追踪和共培养以了解更多信息。
CellBrite® Steady Dyes 已被验证用于标记纯化的细胞外囊泡 (EV) 和外泌体。然而，我们的测试表明 CellBrite® Steady 可以非特异性结合珠结合的外泌体。为了对纯化的和珠结合的外泌体进行最佳标记，我们推荐使用我们的ExoBrite™ 膜染色试剂盒。详细了解我们的 ExoBrite™ 染料和经过验证的外泌体和 EV 标记抗体。
CellBrite® Steady 膜染色试剂盒
| Product | Ex/Em | Size | Catalog Number |
|---|---|---|---|
| CellBrite® Steady 405 Membrane Staining Kit | 406/428 nm | 100 Labelings | 30105-T |
| 500 Labelings | 30105 | ||
| CellBrite® Steady 488 Membrane Staining Kit | 505/529 nm | 100 Labelings | 30106-T |
| 500 Labelings | 30106 | ||
| CellBrite® Steady 550 Membrane Staining Kit | 562/579 nm | 100 Labelings | 30107-T |
| 500 Labelings | 30107 | ||
| CellBrite® Steady 650 Membrane Staining Kit | 656/676 nm | 100 Labelings | 30108-T |
| 500 Labelings | 30108 | ||
| CellBrite® Steady 685 Membrane Staining Kit | 686/708 nm | 100 Labelings | 30109-T |
| 500 Labelings | 30109 |
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。
我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。
生物科学试剂盒
产品信息表上列出了自收到生物科学试剂盒之日起保证的保质期。一些套件在套件盒标签上印有有效期，这是从产品从我们工厂发货之日算起的保证保质期。套件的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧试剂盒，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该试剂盒仍适用于您的应用。
抗体和其他偶联物
产品信息表上列出了抗体和偶联物自收货之日起的保证保质期。抗体和其他结合物的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧偶联物，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该产品仍适用于您的应用。
对于冻干抗体，我们建议用甘油和抗菌防腐剂（如叠氮化钠）重构抗体以获得最长的保质期（请注意，叠氮化钠与 HRP 偶联物不相容）。
化学品、染料和凝胶染色剂
Biotium 保证化学品、染料和凝胶染色剂在您收到产品之日起至少一年内保持稳定。然而，只要按照建议储存，这些产品中的大多数在多年内都非常稳定。存储条件可在产品信息表或产品安全和数据表、材料安全数据表以及产品标签上找到。荧光化合物应避光以便长期储存。
如果您希望使用已储存超过一年的 Biotium 化合物，我们建议您进行小规模阳性对照实验，以确认该化合物在处理大量样品或珍贵样品之前仍适用于您的应用样品。
基于生产日期的有效期 (DOM)
如果您的机构要求您记录基于试剂生产日期的有效期，请联系 techsupport@biotium.com 寻求帮助。
有特殊稳定性考虑的化工产品：
酯类
酯类化合物包括：
• 琥珀酰亚胺酯（SE，也称为 NHS 酯），例如我们的胺反应性染料
• 乙酰氧基甲基酯（AM 酯），例如我们的膜渗透性离子指示剂染料
• 二乙酸酯改性染料，例如 ViaFluor ™ 405、CFDA 和 CFDA-SE 细胞活力/细胞增殖染料
只要避光和防潮，酯类染料在固体形式下是稳定的。酯在水溶液中不稳定。应在无水 DMSO中制备浓缩储备液（参见 Biotium 目录号90082）。无水 DMSO 中的储备液可在 -20°C 下干燥保存一个月或更长时间。酯类应在使用前立即用水溶液稀释。琥珀酰亚胺酯 (SE) 应溶解在不含会与 SE 官能团反应的含胺化合物（如 Tris、甘氨酸或蛋白质）的溶液中。AM 酯和二乙酸化合物应溶解在不含血清的溶液中，因为血清可能含有会水解该化合物的酯酶。
关于 CF® 染料琥珀酰亚胺酯稳定性的说明
琥珀酰亚胺酯 (SE) 通常容易水解，从而导致标记效率降低。许多用于生命科学研究的市售荧光染料都是高度磺化的染料，这使得它们特别容易吸湿，从而加剧了水解问题。此外，对于几种市售的 SE 活性染料，SE 基团衍生自芳香族羧酸，而 Biotium 的所有 CF® 染料中的 SE 基团均由脂肪族羧酸制备。这种结构差异降低了 CF® Dye SE 反应基团对水解的敏感性，从而产生相对稳定的活性染料，与其他荧光染料的其他 SE 衍生物相比，标记效率始终更高。
马来酰亚胺、MTS 和硫代硫酸盐染料
与琥珀酰亚胺酯染料一样，这些染料也容易水解，尽管水解程度通常要低得多。因此，对于长期储存，建议使用无水 DMSO 制备储备液。
其他活性染料
胺类、氨氧基（也称为甲醛）、酰肼、叠氮化物、炔烃、BCN 和酪胺类活性染料，以及染料游离酸，在-20°C 下储存 6-12 年时通常在水溶液中稳定几个月或更长时间，只要不存在可能与染料的官能团发生反应的化合物。有关特定活性染料的更多信息，请参阅产品信息表。
腔肠素和 D-荧光素
按照建议储存时，腔肠素以固体形式稳定；它们在水溶液中不稳定。应在乙醇或甲醇中制备浓缩腔肠素储备液（通常为 1-100 mg/mL）；不要使用 DMSO 或 DMF 溶解腔肠素，因为这些溶剂会氧化化合物。腔肠素的乙醇或甲醇库存可在 -20°C 或以下储存六个月或更长时间；酒精储备在储存过程中可能会蒸发，因此请使用密封的螺旋盖小瓶并用封口膜包裹小瓶以进行长期储存。丙二醇也可用作溶剂以减少蒸发。如果溶剂蒸发，腔肠素仍会存在于小瓶中，因此在储存前记下小瓶中的体积，以便您可以根据需要调整溶剂体积以校正蒸发。使用前立即在水性缓冲液中制备工作溶液。腔肠素在水溶液中最多可稳定 5 小时。
Aquaphile™ 腔肠素是腔肠素的水溶性制剂。当按照建议储存时，它们以固体形式稳定。Aquaphile™ 腔肠素应在使用前立即溶解在水溶液中。它们在水溶液中最多可稳定 5 小时。
请注意，腔肠素主要是黄色固体，但可能含有深红色或棕色斑点。这不会影响产品稳定性或性能。如果您的腔肠素呈均匀的棕色，则说明它已被氧化，需要更换。
D-荧光素在固体形式下是稳定的，并且在按照建议储存时作为浓缩储备液；它在水溶液中的稀释工作浓度下不稳定。在水中制备浓缩的 D-荧光素储备溶液（通常为 1-100 mg/mL），并在 -20°C 或更低温度下分装储存六个月或更长时间。使用前立即准备工作解决方案。
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数天，但我们建议在 4°C 或 -20°C 下储存以延长保质期。对于我们的许多染料水溶液，这些化合物在室温下非常稳定，但我们建议冷藏以防止霉菌或其他微生物随着时间的推移而生长。因此，为节省运输成本，建议在 4°C 或 -20°C 下储存的产品可以在环境温度下或使用冰袋运输。这些产品可能会解冻而不影响产品性能。当您收到产品时，请将其置于推荐的存储条件下。
一些产品随附蓝色冰袋作为额外的高温预防措施。蓝色冰袋可在到达时解冻，而不会影响产品性能。