VeriFluor™ Far-Red 是一种远红无源参考染料，用于在 qPCR 期间标准化荧光报告信号并消除孔间差异。它是使用 ROX 被动参比染料进行标准化的替代方法，也是 Mustang Purple™ 的直接替代品。

• 用于红色通道中 qPCR 标准化的 ROX 替代方案

• 在大多数乐器上替换 Mustang Purple™

• 与 Mustang Purple™ 不同，在 qPCR 反应中耐受 DTT

• 比 ROX 更易溶解，更容易混合并获得更准确的结果

• 与我们的 Forget-Me-Not™ Master Mixes 或其他混合物一起使用的独立染料溶液

qPCR 标准化的更大灵活性

一些 qPCR 仪器需要被动参考染料来标准化报告染料信号并补偿与 qPCR 反应无关的孔间光学变化。通常，ROX 被动参考染料用于标准化。然而，使用 ROX 会阻止在多重检测中使用橙色发射通道进行目标检测。VeriFluor™ Far-Red 使用红色或 Mustang Purple™ 通道进行标准化，释放 ROX 通道以检测标记有 JUN™、Cy®3.5、CAL Fluor® Red 610 或 Texas Red® 等染料的探针。

VeriFluor™ Far-Red 的 Ex/Em 为 640/660 nm，这使其成为大多数 qPCR 仪器中 Mustang Purple™ 的直接替代品。与 Mustang Purple™ 不同，VeriFluor™ Far-Red 可作为独立染料溶液与您最喜欢的预混液一起使用。它与我们的 Forget-Me-Not™ Master Mixes 搭配得非常好，而且在其他市售的 Master Mixes 中表现同样出色。此外，VeriFluor™ Far-Red 具有高度可溶性。与 ROX 相比，VeriFluor™ Far-Red 更容易溶解在预混液中，从而提高了孔间的均质性和更准确的 qPCR 标准化。

在 qPCR 反应中耐受 DTT

DTT 是一种用于 DNA 提取的常用还原剂，已知可淬灭 Mustang Purple™ qPCR 被动参考染料（Forensic Sci Int Genet. 5. e5 (2015)；  J Forensic Sci, 66. 700 (2021)）。结果，归一化失败并且检测高估了样本中的 DNA 浓度。由于 VeriFluor™ Far-Red 可以耐受 DTT（图 1），因此可以在不改变实验方案的情况下使用它来去除 DTT。同样，使用 EvaGreen® 进行的定量不受 DTT 的影响（图 1），这使得这些染料成为结合 DTT 的直接 PCR 分析的理想组合。

图 1. Forget-Me-Not™ Master Mix 与 EvaGreen®（绿色）和 VeriFluor™ 远红被动参考（紫色）在 QuantStudio 5 qPCR 仪器上的非标准化 qPCR 图。VeriFluor™ Far-Red 或 EvaGreen® 信号在使用或不使用 4mM DTT 时没有明显差异。

 EvaGreen Dye 和应用程序涵盖在已授予和正在申请的美国和国际专利中。Mustang Purple、JUN 和 Texas Red 是 Thermo Fisher Scientific 的商标或注册商标。Cy Dye 是 GE Healthcare 的注册商标。CAL Fluor 是 Biosearch Technologies, Inc. 的注册商标。HRM 是 Idaho Technologies, Inc./BioFire Defense, LLC 的注册商标，其使用可能需要获得许可。