GloMelt™ Thermal Shift Protein Stability Kit
GloMelt™ Thermal Shift Protein Stability Kit 用于检测蛋白质去折叠或通过执行热位移测定来测量热稳定性,也称为 Protein Thermal Shift™、差示扫描荧光法或 Thermofluor 测定。
特征
最适合 qPCR 仪器和 ROX 标准化的绿色荧光
与高浓度洗涤剂兼容
耐受较宽的 pH 范围、还原剂和常见的缓冲液/赋形剂
非常适合高通量检测、低反应量和低蛋白质浓度
在水性缓冲液中高度溶解和稳定
套件组件
GloMelt™ 染料,200X
山羊 IgG 对照,10 mg/mL
ROX 参考染料,40 uM(仅限 33022-T/33022-1)
光谱特性
GloMelt™ 染料 Ex/Em 468/507 nm
ROX 参考染料 Ex/Em 575/600 nm
关于 GloMelt™ 热迁移蛋白稳定性试剂盒
环境敏感的荧光染料可用于监测蛋白质的温度依赖性展开。蛋白质的解链温度 (Tm) 是蛋白质热稳定性的指标。
GloMelt™ 染料在与变性蛋白质的疏水区域结合后会发生荧光增强,因此可用于检测蛋白质去折叠或通过执行热位移分析(也称为蛋白质热位移™、差示扫描荧光法或 Thermofluor 分析)来测量热稳定性。
热位移测定是一种快速且廉价的技术,可量化蛋白质变性温度的变化,因此可用于筛选影响蛋白质热稳定性的条件,例如蛋白质突变、配体结合和缓冲液配方(如 pH、盐、去垢剂)和其他添加剂)。这些测定快速(通常约 30 分钟)并在定量 PCR 系统上进行。热位移方法与高通量筛选兼容,并且比圆二色性和差示扫描量热法等方法需要更少的蛋白质。
要了解有关 GloMelt™ 的更多信息并查看它与竞争对手产品的比较,请访问我们的GloMelt™ 技术页面。
热位移分析的可能用途
优化缓冲液配方以提高蛋白质稳定性和储存
确定突变如何影响蛋白质的稳定性
快速筛选用于蛋白质结合的小分子候选药物和其他配体
溴结构域蛋白的小分子抑制剂已在癌症模型中显示出治疗效果。在此,在溴结构域抑制剂 JQ1 或 RVX-208 存在的情况下,对 10 ug 溴结构域 BRD2 进行了 GloMelt™ 热迁移测定。如熔解曲线的变化所示,抑制剂结合使蛋白质稳定。
GloMelt™ 染料与竞争对手
与 SYPRO® Orange 和 PROTEOSTAT® TS 染料等其他环境敏感染料相比,GloMelt™ 染料具有显着优势。GloMelt™ 染料会产生强信号,因为它已针对 qPCR 仪器的 SYBR® Green 通道进行检测进行了优化,因此可以使用低反应体积和低蛋白质浓度。GloMelt™ 染料与高浓度的蛋白质稳定剂(如甘油和山梨糖醇)以及蛋白质去稳定剂(如 DTT 和咪唑)兼容。与 SYPRO® Orange 不同,GloMelt™ 染料在高洗涤剂浓度下表现非常出色。另一个优点是 ROX 染料可以在热迁移分析期间与 GloMelt™ 染料一起使用,这通过增加需要 ROX 被动参考染料的 PCR 仪器的重复一致性来改善结果。
SYBR 是 Thermo Fisher Scientific 的注册商标。Proteostat 是 Enzo Life Sciences 的注册商标。
参考
188bet体育电竞(2019)8,e47172。doi:10.7554/eLife.47172
PLOS ONE (2021) 16(1), e0245013。https://doi.org/10.1371/journal.pone.0245013