Firefly Luciferase Assay Kit 2.0

用于在转染细胞报告基因测定中测量萤火虫荧光素酶的高灵敏度和线性闪光型发光测定。

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50 assays

30085-T

150 assays

30085-1

1,000 assays

30085-2

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该试剂盒旨在测量转染细胞报告基因检测中的萤火虫荧光素酶活性。

特征

高灵敏度和线性闪光型测定
每次检测都添加新鲜的底物，以确保信号随时间推移保持一致
与其他供应商相比，卓越的性能和巨大的价值

套件组件

5X 萤火虫萤光素酶裂解缓冲液
萤火虫萤光素酶检测缓冲液 2.0
D-荧光素

萤火虫荧光素酶被广泛用作研究基因调控和功能以及药物筛选的报告基因。由于哺乳动物细胞或组织中不存在内源性荧光素酶活性，它是一种非常敏感的遗传报告基因。萤火虫萤光素酶是一种 62,000 道尔顿的蛋白质，它作为单体具有活性，并且不需要对其活性进行后续加工。该酶催化 ATP 依赖性 D-荧光素氧化为氧化荧光素，产生光发射。萤火虫荧光素酶遵循 Michaelis-Menten 动力学，因此，直到底物和辅因子大量过量存在时，才能实现最大光输出。在这些条件下进行分析时，反应发出的光与荧光素酶分子的数量成正比。

注意：这是一种闪光型发光检测，需要在将工作溶液添加到样品后立即测量信号。它需要一个带有试剂注射器的单管发光计或发光酶标仪。Biotium 还提供Steady-Luc HTS Firefly 检测试剂盒（货号 30028L），这是一种同质发光型检测，信号半衰期为 3-5 小时。

易于使用以获得一致的结果

该萤火虫萤光素酶检测试剂盒设计用于简单有效地定量培养细胞中萤火虫萤光素酶报告酶的活性，具有高灵敏度和线性。该试剂盒是 Firefly 萤光素酶检测试剂盒（目录号 30003）的全新改进替代品。它采用 Firefly Assay Buffer 2.0，与原始检测缓冲液相比，它具有更好的工作溶液稳定性。

其他商业萤光素酶检测要求您在检测缓冲液中稀释所有萤火虫底物，导致首次使用后保质期有限。在 Biotium 的试剂盒中，底物以单独的储备溶液形式提供，每次检测都经过新鲜稀释，从而获得出色的保质期，并随着时间的推移提供一致的信号。

测定大小基于 96 孔格式。该试剂盒包括足够的细胞裂解缓冲液，可在 96 孔至 24 孔的板尺寸范围内执行规定数量的测定。如果需要，可以单独购买额外的5X Firefly Lysis Buffer （目录号 99923）。

Biotium 还提供Firefly & Renilla 萤光素酶单管检测试剂盒（目录号 30081），这是一种组合萤光素酶检测试剂盒，用于连续测量同一样品中的萤火虫和海肾萤光素酶活性，具有高灵敏度和线性。

更多荧光素酶试剂盒及相关产品

目录编号	产品	描述
30085	萤火虫萤光素酶检测试剂盒 2.0	闪光型萤火虫荧光素酶检测试剂盒。
30075	萤火虫萤光素酶检测试剂盒（冻干）	萤火虫荧光素酶检测试剂盒，带有冻干检测缓冲液，可在室温下进行经济运输，并在 -20°C 下方便储存。
99923	5X Firefly 裂解缓冲液	用于萤火虫荧光素酶检测试剂盒的额外裂解缓冲液，仅在使用大于 24 孔的孔时才需要。
30028	Steady-Luc™ Firefly HTS 检测试剂盒	发光型萤火虫荧光素酶检测，信号半衰期约为 3 小时，用于多孔板中的高通量筛选。
30028L	Steady-Luc Firefly HTS 检测试剂盒（冻干）	Steady-Luc 试剂盒带有冻干测定缓冲液，可在室温下进行经济运输，并在 -20°C 下方便地储存。
30082	海肾萤光素酶检测试剂盒 2.0	Flash 型海肾萤光素酶检测试剂盒。
99912	5X 被动裂解缓冲液	用于海肾荧光素酶检测试剂盒的额外裂解缓冲液，仅在使用大于 24 孔的孔时才需要。
30081	Firefly 和 Renilla 萤光素酶单管检测试剂盒	用于在单个试管中按顺序测量同一样品中的萤火虫和海肾活动的检测试剂盒。
99821-100mL	1X 被动裂解缓冲液 2.0	用于 Firefly 和 Renilla 单管检测试剂盒的额外裂解缓冲液，仅在使用大于 24 孔的孔时才需要。
30020	ATP-Glo™ 生物发光细胞活力检测试剂盒	用于测量细胞活力或 ATP 浓度的基于闪光型发光的测定。
22003	迷你细胞刮刀	微型细胞刮刀，用于裂解 96 孔、48 孔或 24 孔板中的细胞。

参考文献

1.ACS Nano（2018）12（7），6504–6514。doi:10.1021/acsnano.7b08777

2.细胞组织研究（2018）371（2），293–307。doi:10.1007/s00441-017-2726-5

3.生物化学杂志（2019）2945456-5465。doi:10.1007/s00441-017-2726-5

4.《生理学杂志》597.4（2019），第1185–1197页。https://doi.org/10.1113/JP276054

5.《维罗尔杂志》（2019）93，e00544-19。https://doi.org/10.1128/JVI.00544-19

6.bioRxiv（2020）doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.19.956565

产品属性

化验类型/选项：终点测定，发光（闪光型）

检测方法/读数：光度计（带试剂注射器的单管或微量板读取器）

储存条件：在-60°C或更低温度下储存

常见问题

我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。

我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。

Promega测定	Promega 目录号	生物素替代品	Biotium 目录号	检测类型	笔记
Steady-Glo® 分析系统	E2510、E2520、E2550	Steady-Luc™ 萤火虫 HTS 检测试剂盒	30028	辉光	信号半衰期约为 3 小时。根据需要将荧光素酶底物添加到检测缓冲液中，因此信号在试剂盒储存期间不会下降。
Steady-Luc™ 萤火虫 HTS 检测试剂盒（冻干）	30028L	辉光	信号半衰期约为 3 小时。冻干形式，便于运输和储存。
萤火虫荧光素酶检测系统	E1483、E1500、 E1501、E4030、 E4530、E4550	萤火虫荧光素酶检测试剂盒 2.0	30085	闪光	根据需要将荧光素酶底物添加到检测缓冲液中，因此信号在试剂盒储存期间不会下降。
萤火虫荧光素酶检测试剂盒（冻干）	30075	闪光	冻干形式，便于运输和储存。
海肾荧光素酶检测系统	E2810, E2820	海肾荧光素酶检测试剂盒 2.0	30082	闪光	含有 Biotium 的水溶性 Aquaphile™ 腔肠素。
Dual-Luciferase® 检测系统（萤火虫和海肾）	E1910, E1960, E1980	萤火虫和海肾萤光素酶单管检测试剂盒	30081	闪光	在一个试管中依次测量同一样本中的萤火虫和海肾荧光素酶活性。
CellTiter-Glo® 发光细胞活力测定	G7570、G7571、 G7572、G7573	ATP-Glo™ 细胞活力测定	30020	闪光	Cell Titer Glo® 是一种发光型测定（5 小时半衰期）；ATP-Glo™ 是一种闪光型检测（信号稳定 1 分钟）。

生物科学试剂盒
产品信息表上列出了自收到生物科学试剂盒之日起保证的保质期。一些套件在套件盒标签上印有有效期，这是从产品从我们工厂发货之日算起的保证保质期。套件的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧试剂盒，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该试剂盒仍适用于您的应用。

抗体和其他偶联物
产品信息表上列出了抗体和偶联物自收货之日起的保证保质期。抗体和其他结合物的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧偶联物，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该产品仍适用于您的应用。

对于冻干抗体，我们建议用甘油和抗菌防腐剂（如叠氮化钠）重构抗体以获得最长的保质期（请注意，叠氮化钠与 HRP 偶联物不相容）。

化学品、染料和凝胶染色剂
Biotium 保证化学品、染料和凝胶染色剂在您收到产品之日起至少一年内保持稳定。然而，只要按照建议储存，这些产品中的大多数在多年内都非常稳定。存储条件可在产品信息表或产品安全和数据表、材料安全数据表以及产品标签上找到。荧光化合物应避光以便长期储存。

如果您希望使用已储存超过一年的 Biotium 化合物，我们建议您进行小规模阳性对照实验，以确认该化合物在处理大量样品或珍贵样品之前仍适用于您的应用样品。

基于生产日期的有效期 (DOM)
如果您的机构要求您记录基于试剂生产日期的有效期，请联系 techsupport@biotium.com 寻求帮助。

有特殊稳定性考虑的化工产品：

酯类

酯类化合物包括：
• 琥珀酰亚胺酯（SE，也称为 NHS 酯），例如我们的胺反应性染料
• 乙酰氧基甲基酯（AM 酯），例如我们的膜渗透性离子指示剂染料
• 二乙酸酯改性染料，例如 ViaFluor ™ 405、CFDA 和 CFDA-SE 细胞活力/细胞增殖染料

只要避光和防潮，酯类染料在固体形式下是稳定的。酯在水溶液中不稳定。应在无水 DMSO中制备浓缩储备液（参见 Biotium 目录号90082）。无水 DMSO 中的储备液可在 -20°C 下干燥保存一个月或更长时间。酯类应在使用前立即用水溶液稀释。琥珀酰亚胺酯 (SE) 应溶解在不含会与 SE 官能团反应的含胺化合物（如 Tris、甘氨酸或蛋白质）的溶液中。AM 酯和二乙酸化合物应溶解在不含血清的溶液中，因为血清可能含有会水解该化合物的酯酶。

关于 CF® 染料琥珀酰亚胺酯稳定性的说明

琥珀酰亚胺酯 (SE) 通常容易水解，从而导致标记效率降低。许多用于生命科学研究的市售荧光染料都是高度磺化的染料，这使得它们特别容易吸湿，从而加剧了水解问题。此外，对于几种市售的 SE 活性染料，SE 基团衍生自芳香族羧酸，而 Biotium 的所有 CF® 染料中的 SE 基团均由脂肪族羧酸制备。这种结构差异降低了 CF® Dye SE 反应基团对水解的敏感性，从而产生相对稳定的活性染料，与其他荧光染料的其他 SE 衍生物相比，标记效率始终更高。

马来酰亚胺、MTS 和硫代硫酸盐染料
与琥珀酰亚胺酯染料一样，这些染料也容易水解，尽管水解程度通常要低得多。因此，对于长期储存，建议使用无水 DMSO 制备储备溶液。

其他活性染料
胺类、氨氧基（也称为甲醛）、酰肼、叠氮化物、炔烃、BCN 和酪胺类活性染料，以及染料游离酸，在-20°C 下储存 6-12 年时通常在水溶液中稳定几个月或更长时间，只要不存在可能与染料的官能团发生反应的化合物。有关特定活性染料的更多信息，请参阅产品信息表。

腔肠素和 D-荧光素

按照建议储存时，腔肠素以固体形式稳定；它们在水溶液中不稳定。应在乙醇或甲醇中制备浓缩腔肠素储备液（通常为 1-100 mg/mL）；不要使用 DMSO 或 DMF 溶解腔肠素，因为这些溶剂会氧化化合物。腔肠素的乙醇或甲醇库存可在 -20°C 或以下储存六个月或更长时间；酒精储备在储存过程中可能会蒸发，因此请使用密封的螺旋盖小瓶并用封口膜包裹小瓶以进行长期储存。丙二醇也可用作溶剂以减少蒸发。如果溶剂蒸发，腔肠素仍会存在于小瓶中，因此在储存前记下小瓶中的体积，以便您可以根据需要调整溶剂体积以校正蒸发。使用前立即在水性缓冲液中制备工作溶液。腔肠素在水溶液中最多可稳定 5 小时。

Aquaphile™ 腔肠素是腔肠素的水溶性制剂。当按照建议储存时，它们以固体形式稳定。Aquaphile™ 腔肠素应在使用前立即溶解在水溶液中。它们在水溶液中最多可稳定 5 小时。

请注意，腔肠素主要是黄色固体，但可能含有深红色或棕色斑点。这不会影响产品稳定性或性能。如果您的腔肠素呈均匀的棕色，则说明它已被氧化，需要更换。

D-荧光素在固体形式下是稳定的，并且在按照建议储存时作为浓缩储备液；它在水溶液中的稀释工作浓度下不稳定。在水中制备浓缩的 D-荧光素储备溶液（通常为 1-100 mg/mL），并在 -20°C 或更低温度下分装储存六个月或更长时间。使用前立即准备工作解决方案。

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