Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix (Low ROX or High ROX)
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2X Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix 是一种即用型高性能染料预混液，用于 qPCR 和 DNA 熔解曲线分析。2X Master Mix 包含 EvaGreen® 染料、预混合的 ROX、Cheetah™ HotStart Taq DNA 聚合酶、dNTP 和低浓度的 Forget-Me-Not™ 蓝色示踪染料。
即用型，只需添加引物和 DNA 模板
使用比 SYBR® Green I 和其他商业 PCR 染料更灵敏的优质 EvaGreen® 染料进行优化
使用我们的 Forget-Me-Not™ 浅蓝色预混液防止样品浪费和其他代价高昂的错误
与 ROX 预混并针对需要高浓度或低浓度 ROX 参比染料的仪器进行了优化
采用 Cheetah™ HotStart Taq 配制，用于快速循环协议
直接可视化凝胶中的扩增产物
图 1：Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix 含有低浓度的惰性蓝色染料，使用户能够直观地区分含有反应混合物的孔和空孔，从而减少移液错误，节省时间和试剂.
勿忘我™色彩追踪
发现移液错误，避免浪费时间、试剂和珍贵的 DNA 样本。Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mixes 与预混 ROX，具有浅蓝色，因此您可以轻松区分含有反应混合物的管/孔和空管/孔（图 1）。本产品适用于希望使用单色跟踪的用户。我们还提供Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix（2-Color Tracking），它允许对 Master Mix 和模板溶液进行颜色跟踪。
安心加上 PCR 性能
Forget-Me-Not™ qPCR Master Mix 专为快速循环 PCR 参数而配制，但也可与常规循环协议一起使用。Forget-Me-Not™ qPCR Master Mix 的性能与我们的 Fast EvaGreen® Master Mix 一样好，在实时 PCR 分析中与 Qiagen 的 QuantiNova® SYBR® Green PCR Master Mix 一样或更好（图 2），同时使很容易确保您的反应在第一次，每次都正确设置。
图 2. 实时 PCR 数据比较 Forget-Me-Not™（蓝线）与 Biotium 的 Fast EvaGreen®（绿线）和 Qiagen 的 QuantiNova® SYBR® Green（灰线）预混液。A. 线性放大曲线。与基于 SYBR® Green 的混合物相比，基于 EvaGreen® 染料的预混液产生更高的信号。B. 对数刻度的放大曲线。Forget-Me-Not™ 的性能与其他主混音一样好或更好。NTC：非模板控件（虚线）。
EvaGreen® 染料
一种环保、非诱变和非细胞毒性 DNA 结合染料，具有非常适合 qPCR 和高分辨率 Melt® (HRM) 分析的特性（参考文献 3）。EvaGreen® Dye 通过一种新的“按需释放”机制与 dsDNA 结合，其中染料处于非活性构象直到 DNA 可用。由于 DNA 在 PCR 过程中产生，染料转变为结合 DNA 以发射荧光的活性构象。因此，与 SYBR® Green I（参考文献 1）相比，在 qPCR 中，EvaGreen® Dye 可以在更高的染料浓度下使用。该染料具有非常接近荧光素 (FAM) 或 SYBR® Green I 的激发和发射光谱，使其易于与配备 488 nm 氩激光或任何具有该区域波长的可见光激发的仪器兼容。
独立实验室已经证实，EvaGreen® 染料不会引起突变、无细胞毒性，并且对水生生物是安全的，可以直接丢弃在下水道中。其他商业 PCR 染料可在几分钟内进入细胞。例如，SYBR® Green I 已被证明比溴化乙锭（一种众所周知的诱变剂）对环境的毒性更大（参考文献 2）。有关详细信息，请下载EvaGreen® 染料安全报告。
了解更多关于用于 qPCR 的 EvaGreen® 染料。
Cheetah™ HotStart Taq
Cheetah™ HotStart Taq DNA 聚合酶是 Biotium 专有的化学修饰热启动 DNA 聚合酶。Cheetah™ Taq 在室温下完全失活，在 95°C 下 2 分钟后完全激活，使其特别适用于快速循环 PCR 方案。
ROX
Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix with Premixed ROX 有两种配方可供选择：低 ROX 预混液（~50 nM 最终检测 ROX 浓度）和高 ROX 主混液（~500 nM 最终检测浓度）。在某些 qPCR 系统中需要 ROX 作为无源参考染料，以补偿孔间光学变化。有关实时荧光定量 PCR 仪器的被动染料要求，请参阅下表。
| 参考染料 | PCR仪 |
|---|---|
| 低 ROX (~50 nM) | Applied Biosystems®：7500、7500 Fast、ViiA™7、Quant-Studio™ 仪器 Stratagene（安捷伦）：MX4000P、MX3000P、MX3005P |
| 高 ROX (~500 nM) | Applied Biosystems®：5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、StepOne™、StepOnePlus™ |
| 无需 ROX* | BioRad：iCycler™、MyiQ™、MiQ™ 2、iQ™ 5、CFX-96 Touch™、CFX-384 Touch™ 和 Connect™、Chromo4™、MiniOpticon™ Qiagen：Rotor-Gene® Q、Rotor-Gene® 3000、 Rotor-Gene®6000 Eppendorf：Mastercycler® Realplex Illumina：Eco™ RealTime PCR System Cepheid：SmartCyler® Roche：LightCycler® 480、LightCycler® 2.0 |
| 荧光素** | BioRad：iCycler™、MyiQ™、MiQ™、iQ™ |
*不需要 ROX 参考染料的仪器通常与含有 ROX 的 qPCR 预混液兼容（使用前请咨询制造商）。我们还销售不带 ROX 的 Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix 试剂盒（货号 31041）和单独的 ROX 管（货号 31042），可用于制作您自己的低或高 ROX 预混液。
**Bio-Rad 的 iCycler™ 用户无需在 PCR 反应中添加荧光素，因为 EvaGreen® 染料具有轻微的背景荧光，可提供足够且稳定的基线水平荧光。对于这些仪器，我们建议使用不带 ROX 的 Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix (cat# 31041)。
EvaGreen Dye 和 Cheetah Taq 受美国和国际专利保护。QuantiNova 是 Qiagen 集团的注册商标。SYBR 是 Thermo Fisher Scientific 的注册商标。HRM 是 Idaho Technologies, Inc./BioFire Defense, LLC 的注册商标；使用 HRM 可能需要许可证。
参考
1. BMC Biotechnol (2007) https://doi.org/10.1186/1472-6750-7-76
2. 突变研究。(2001) https://doi.org/10.1016/S1383-5718(01)00155-3
3. 寄生虫病媒 (2019) https://doi.org/10.1186/s13071-019-3781-4
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。
我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。
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