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NucView® caspase-3 底物是 Biotium 的专利荧光底物，专为实时检测活细胞凋亡而设计。
怎么运行的
NucView® caspase-3 底物基于新型荧光 DNA 染料，该染料已与 caspase-3/7 识别序列 (DEVD) 偶联。当引入细胞时，底物最初是非荧光的，并且能够穿透质膜并进入细胞质。在细胞凋亡过程中，caspase-3/7 裂解底物并释放高亲和力 DNA 染料，从而导致核荧光染色。因此，NucView caspase-3 底物具有双功能，可以检测 caspase-3/7 活性并可视化细胞凋亡过程中细胞核的形态变化。
与抑制 caspase 活性的其他荧光 caspase 底物或基于荧光 caspase 抑制剂 (FLICA) 的检测相比，NucView® caspase-3 底物可用于检测活细胞中的 caspase-3/7 活性，而不抑制细胞凋亡进程。染色还与下游免疫染色的后续固定和透化兼容。
特征
Caspase活性和核形态的双重检测
快速、免洗、终点或实时检测
无毒，可进行多天实验
用于流式细胞术、显微镜或活细胞成像系统
可作为独立的底物或与其他细胞凋亡或坏死探针搭配使用的试剂盒
HeLa 细胞用 NucView® 488 Caspase-3 底物 (2 uM)、MitoView™ 633 线粒体电位染料 (50 nM) 和 Hoechst 33342 蓝色核染料 (1 ug/mL) 染色，然后用 1 uM 星形孢菌素处理以诱导细胞凋亡.
提供蓝色、绿色或红色荧光
用 NucView® 405 Caspase-3 底物（蓝色）和 CF®488A Annexin V（绿色）染色的凋亡 HeLa 细胞。
用 NucView® 488 Caspase-3 底物（绿色）和 CF®594 Annexin V（红色）染色的凋亡 HeLa 细胞。
用 NucView® 530 Caspase-3 底物（红色）和 CF®488A Annexin V（绿色）染色的凋亡 MCF-7 细胞。
通过流式细胞术分析活细胞的细胞凋亡
使用 DMSO（阴性对照，蓝色）或 0.1 uM、0.25 uM 或 1 uM 星形孢菌素（红色）处理 Jurkat 细胞，以在 NucView® 530 和 CF®405M Annexin V 存在的情况下在 37°C 下诱导细胞凋亡 4 小时，然后BD LSR II 流式细胞仪分析。NucView® 530 和 CF®405M Annexin V 的染色随着星形孢菌素浓度的增加而增加。
在 BD LSRII 流式细胞仪（405 nm 激发，450/50 nm 发射滤光片）的 Pacific Blue® 通道中分析用 NucView® 405 Caspase-3 底物检测经星形孢菌素诱导细胞凋亡的 Jurkat 细胞中 caspase-3 的时程.
双检测试剂盒
探索将 NucView® 实时细胞凋亡分析的优势与其他用于监测坏死、膜电位或其他细胞凋亡标记物的探针相结合的检测试剂盒。
双细胞凋亡试剂盒：NucView® 488 和 Annexin V标记有红色或远红色染料，用于共同检测两种细胞凋亡事件，caspase 裂解和磷脂酰丝氨酸 (PS) 易位。
双细胞凋亡试剂盒：NucView® 488 和 MitoView™ 633用于共同检测两种细胞凋亡事件，caspase 裂解和线粒体膜电位丢失。
细胞凋亡/坏死试剂盒：NucView® 488 和 RedDot™2，用于同时测量半胱天冬酶裂解（细胞凋亡）和膜完整性丧失（坏死）。
使用 NucView® 488 和 MitoView™ 633 细胞凋亡试剂盒对经星形孢菌素（绿色）或 DMSO 对照（粉红色）处理以诱导细胞凋亡的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。在 BD FACSCalibur 流式细胞仪上分析荧光。随着星形孢菌素处理的细胞中细胞凋亡随时间的推移而进展，NucView® 488 信号（FL1，x 轴）增加，而通过 MitoView™ 633 染色（FL4，y 轴）测量的线粒体膜电位降低。
NucView® Caspase-3 底物和试剂盒 | 目录号 | 特征 |
Pacific Blue® 通道中的流式细胞仪的蓝色荧光或使用 405 nm 激光的显微镜 | ||
PBS 中的 NucView® 405 底物，适用于 DMSO 敏感细胞类型 | ||
绿色荧光底物已在 100 多种细胞类型和 200 多种出版物中得到验证 | ||
PBS 中的 NucView® 488 底物，适用于 DMSO 敏感细胞类型 | ||
Cy®3 通道中的显微镜检查或 R-PE 通道中的流式细胞术的橙色荧光 | ||
PBS 中的 NucView® 530 底物，适用于 DMSO 敏感细胞类型 | ||
用于 Cy®5 通道的 NucView® 488 和远红荧光 MitoView™ 633 | ||
用于 Cy®5 通道的 NucView® 488 和远红死细胞 DNA 染料 RedDot™ 2 | ||
NucView® 488 和红色荧光膜联蛋白 V 细胞凋亡探针 | ||
Dual Apoptosis Assay with NucView® 488 and CF®640R Annexin V | NucView® 488 和远红荧光膜联蛋白 V 细胞凋亡探针 |
监测细胞凋亡的金标准
NucView® 488 在 100 多种细胞类型和 200 种出版物中得到验证
突出引用： NucView® 488 被Lim 等人用于 T 细胞介导的肿瘤细胞杀伤试验。在一项调查炎症对 PD-L1 稳定性的作用的研究中。结果显示，当用中和性 TNF-α 抗体处理时，T 细胞介导的对表达 PD-L1 的 BT549 导管癌细胞的杀伤不再受到抑制。此外，PD-L1 耗尽细胞对富含细胞因子的巨噬细胞条件培养基 (MP) 或 TNF-α 抗体均无反应，表明 PD-L1 表达是 TNF-α 介导的 T 细胞活性抑制所必需的。
PD-L1 敲除 (PD-L1 KO) BT549 细胞中的 T 细胞介导的肿瘤细胞杀伤试验。显示了在存在 caspase-3/7 底物的情况下 96 小时的活化 T 细胞共培养物的代表性相、红色荧光（核限制性 RFP）和绿色荧光（NucView® 488 caspase-3/7 底物）合并图像。T 细胞用 CD3 抗体 (100 ng/mL) 和 IL-2 (10 ng/mL) 激活。绿色荧光细胞计为死细胞。死细胞的数量比例显示在右侧的条形图中。比例尺，100 微米。图片来源：Lim 等人。doi.org/10.1016/j.ccell.2016.10.010